1
Quando se deve subcultivar uma cultura? ( assinale a opção CORRETA)
A intervalos regulares, sempre com a mesma periodicidade
Antes de se atingir a fase de plateau
Quando a cultura está confluente
Todas as respostas estão corretas
Quando o meio de cultura parece estar exaurido de nutrientes
2
As culturas primarias(selecione a opção CORRETA):
são geralmente homogéneas
Podem entrar rapidamente em senescência
Proliferam bem
Têm geralmente um cariótipo diferente do tecido de origem
Sofrem divisões celulares limitadas
3
Qual a principal diferença em termos de proteção do utilizador entre as câmaras de fluxo laminar vertical e as câmaras de fluxo laminar horizontal? Selecione a opção CORRETA.
Não há diferença em termos de capacidade de proteção entre duas câmaras
A câmara de fluxo horizontal tem mais filtros no percurso do ar filtrado
Os filtros da câmara de fluxo vertical são eficientes
Apenas a câmara de fluxo vertical protege o utilizador
Apenas a câmara de fluxo horizontal protege o utilizador
4
As células não modificadas param de proliferar quando a cultura atinge a confluência. Assinale a opção CORRETA:
Afirmação incorreta, as células não param de proliferar quando ficam confluentes
Afirmação incorreta, a confluência apenas abranda o crescimento celular
Nenhuma das opções está correta
Afirmação correta, devido à inibição de crescimento por contacto entre células
Afirmação correta, porque as células deixam de precisar de soro no meio de cultura depois de ficarem confluentes
5
Indique quais as principais 3 características que um organoide deve apresentar para que possa ser designado como tal:
Estrutura tridimensional; apresenta os vários tipos de células do órgão; Serve para modelar doenças
Organização espacial semelhante à do orgão; Apresenta vários tipos de células do órgão; Recapitula as funções específicas do orgão
Nenhuma opção está correta
Organização espacial semelhante à do orgão; Apresenta apenas um tipo especifico de células do órgão; Serve como plantaforma para testes.
Estrutura tridimensional; apresenta apenas um tipo especifico de células do órgão; recapitula as funções especificas do orgão
6
o que distingue uma cultura mista de uma co-cultura é (selecione a opção CORRETA)
A cultura mista é feita em contacto físico entre as células, e a co-cultura não permite contacto entre as células
A co-cultura permite abaliar a comunicação intracelular através de fatores de contacto
A co-cultura permite avaliar interações célula-substrato
Nenhuma opção está correta
A co-cultura permite avaliar interações célula-célula
7
O sistema de contenção e manuseamento mais adequado a um organismo do grupo de risco 4 é:
Câmara de classe ii
câmara de classe IV
câmara de classe iii
câmara de classe I
não é necessário sistema de contenção, é de baixo risco
8
A imagem mostra uma cultura de células transfectada com um plasmídeo contendo como gene reporter a proteina verde fluorescente(GFP). A eficiência de transfecção nesta experiência foi muito baixa(15%). Qual a possível razão?
A cultura apresentava um confluência baixa na altura em que o vetor foi transfectado
Ainda não passou tempo suficiente após a transfecção para se observar boa expressão do gene reporter
Plasmídeo utilizado não é compatível com o tipo celular a transfectar
Possível contaminação das células com micoplasma
Todas as opções estão corretas
9
Qual a razão de algumas células precisarem de crescer em meio condicionado por outras células(feeder cells ):
As feeder cells podem crescer mais do que as células de interesse quando cultivadas juntas e como tal a utilização do seu meio condicionado contorna este constrangimento
É mais barato condicionar o meio de cultura por feeder cells do que suplementar o meio com os fatores pretendidos
é mais barato condicionar o meio de cultura do que crescer os 2 tipos celulares numa co-cultura
todas as opções estão corretas
Porque podem precisar de fatores de crescimento secretados pelas feeder cells que ainda não foram indentificados e como tal não é possível reproduzir um meio de cultura suplementado com esses fatores
10
As células estabelecem ligações com outras células e com a matriz extracelular que lhes permite organizar-se em tecidos:
Os receptores de adesão celular são sempre independentes de cálcio
a matriz extracelular é produzida por células do sistema imunitário
A laminina é uma glicoproteina importante para a interação entre células e a matriz extracelular
nenhuma opção está correta
A elastina é uma proteoglicano que permite a interação célula-matriz
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Dependendo do tipo celular a cultura de célula pode ser realizada em:
Todas as opções estão corretas
Monocamada
adesão
co-cultura
suspensão
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As Linhas celulares:
Proliferam bem
têm geralmente um cariótipo euplóide
são altamente heterogéneas
sofrem divisões celulares limitadas
Não podem ser cultivadas por longos períodos de tempo
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Como pode identificar uma contaminação por micoplasmas numa cultura de células ?
Através da alteração do pH do meio de cultura
Coloração das mitocôndrias
observação ao microscópio optico
através da alteração da turbidez do meio de cultura
Com um corante de DNA
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Acabou de descongelar um lote de células que recebu há algum tempo de um colega da Universidade de Lisboa. Coloca as células a crescer e verifica que a morfologia que apresentam não é compativel com o tipo de células que deveria ter em cultura. Qual das seguintes possibilidades está correta?
O seu colega envio-lhe as células erradas
Houve uma contaminação por outras células que cresceram muito mais que as suas e tomaram conta da superficie de cultura
Identificou mal as suas células na incubadora
Descongelou o lote errado porque tinha as suas células mal identificadas no contentor de azoto liquido
Todas as opções estão corretas
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Comparando uma cultura primária e uma linha celular continua :
a cultura primária entra em senescência mais rapidamente que a linha celular
a cultura primária é sempre proliferativa
A cultura primária é clonal
a linha celular tem um cariótipo estável
a cultura primária é geralmente homogénea
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Uma cultura de células pode ser feita a partir de tecido adulto ou de tecido embrionário:
tecido adulto tem maior fração de crescimento
tecido embrionário tem células altamente especializadas em grande quantidade
tecido embrionário tem muitas células precursoras
Tecido adulto permite um acultura com um tempo de vida mais longo
E mais difícil iniciar uma cultura a partir de tecido embrionário
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Como pode imobilizar uma cultura celular e fazer uma linha celular continua:
Todas as opções estão corretas
Utilizar genes de virus como o SV40Sobreexpressar a telomerase
Sobreexpressar a telomerase
Utilizar radiação
Sobreexpressar C-myc
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Mutações na CFTR nos doentes com fibrose quistica causam:
Nenhuma opção está correta
Ausência de transporte de iões de cloreto e bicarbonato
Aumento de transporte de iões de cloreto
alterações no transporte de iões de potássio
diminuição da atividade da enzima CFTR
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A glutamina é um aminoácido que se degrada quando a solução, produzindo amónia, que pode ser prejudicial para a cultura. Como pode contornar este constrangimento?
Nenhuma das opções está correta
Utilizar uma forma mais estável da glutamina como o dipéptido L-metionina-L-glutamina
Não colocar glutamina no meio
Utilizar uma forma mais estável da glutamina como o dipéptido L-alanina-L-glutamina
Utilizar uma forma mais estável da glutamina como o dipéptido L-arginina-L-glutamina
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As culturas de células apresenta vantagens e desvantagens:
Pode haver um crescimento elevado de células indiferenciadas
fenótipo do tecido de origem sempre preservado
é uma tecnologia com baixa especialização em termos técnicos e humanos
a quantidade de massa celular produzida é baixa
para qualquer linha celular, o cariótipo é sempre igual ao tecido de origem
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Escolhe a opção que melhor completa a seguinte frase: o uso de cultura de células em terapia génica permite :
Testar vetores de expressão
Avaliar a diferenciação celular
Quantificar a proliferação celular
Avaliar a migração celular
Determinar a concentração celular
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Há alguns equipamentos essenciais para fazer cultura de células:
A câmara de Neubauer é muito utilizada para contar células
Todas as repostas estão corretas
O microscópio de visualização das culturas deve ser invertido
E desejável a presença de sistemas de aspiração por vácuo e centrifugas, bem como armazenamento de frio
As câmaras de fluxo laminar devem ter um fluxo vertical
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A figura mostra a coloração com sondas que avaliam a viabilidade celular (fluorescência, a verde, e iodeto de propídio, a vermelho)de células MCF-7 (uma linha celular de cancro da mama) após tratamento com um fármaco de quimioterapia. Qual a afirmação correta?
Nenhuma das opções está correta
As células do painel A estão menos visíveis que as células do painel B, porque apresentam menos células coradas com iodeto de propídio
As células do painel A estão mais viáveis que as células do painel B, porque apresentam mais células coradas com PI
As células do painel A estão mais viáveis que as células do painel B, porque apresentam menos células coradas com fluoresc ência
As células do painel A estão menos viáveis que as células do painel B, porque apresentam menos células coradas com fluorescência
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Para garantir a esterilidade de uma solução à qual adicionou um suplemento que não tem a certeza de estar estéril, qual o tamanho do poro ou filtro que utilizaria?
0,45 micrómetros
0,2 milimetros
1 micrómetro
0,2 micrómetros
0,55micrómetros
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Vai iniciar um projeto de investigação com uma cultura da linha celular de glioblastoma humano U87. Qual é o sistema de contenção mais adequado a trabalhar com este grupo de risco?
câmara de calsse II
câmara de classe IV
câmara de classe I
câmara de classe IV+
câmara de classe III
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O ambiente de cultura apresenta alguns constrangimentos que podem condicionar o fenótipo das células. Qual dos seguintes não é um constrangimento para células em cultura?
Favorecimento de crescimento e proliferação. em detrimento da diferenciação e expressão de funções especializadas.
Perda de estrutura 3D
Redução dos contatos células-célula e célula-matriz
Ausência de fatores de crescimento/hormonas
Superfície de crescimento carregada negativamente.
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As superficies de cultura devem ser adaptadas à aderência e crescimento celular, uma vez que :
Células que não produzem matriz podem aderir se a superficie de cultura for previamente tratada com componentes de matriz extracelular
Superficies de crescimento próprias para microscopia podem permitir a utilização direta da cultura neste tipo de técnica
Uma superfície carregada negativamente favorece a produção de matriz extracelular pelas células em cultura.
Todas as opções estão corretas
As células aderentes preferem superficies tratadas e especialmente para a cultura celular
28
O uso rotineiro de antibióticos na cultura de células é aconselhado. Concorda ou discorda?
Discordo, porque torna a cultura de células muito cara
Concordo, assim evitam-se contaminações por microorganismos
Discordo, porque pode interferir com o crescimento da cultura
Discordo, o uso continuado pode mascarar contaminações incipientes que de outra forma seriam identificadas
Concordo, deve sempre usar-se antibióticos na cultura de células porque não permitem o crescimento de bactérias
29
Começou a trabalhar com uma linha celular que necessita de soro para crescer adequadamente. No entanto, verifica que o crescimento das células é muito lento. Qual a razão possivel?
soro não foi inativado
utilização de um lote de soro diferente
A placa de cultura não foi revestida com o revestimento correto
Contaminações por microplasma
Todas as opções estão corretas
30
Vai utilizar uma linha celular cujas exatas condições de cultura são conhecidas. Qual o meio de cultura que lhe permite ter maior reproducibilidade experimental?
Nenhuma opçõa está correta
Meio de cultura condicionado por feeder cells
Meio de cultura com soro e condicionado por feeder cells
Meio de cultura sem soro
Meio de cultura com soro
31
Qual dos seguintes é indicativo de atmosfera com baixo CO2( abaixo do normal) numa incubadora?
Diminuição do pH do meio
Alterações fenotipicas das células
Alterações da turbidez do meio de cultura
Depleção de nutrientes
Meio de cultura de core de rosa intensa
32
Nem todas as células secretam matriz extracelular. Qual a alternativa correta para aderir estas células numa superficie de cultura?
Revestimento da superficie com componentes da matriz
Utilização de feeder cells na superficie de cultura
Utilização de superficies de cultura de plástico de boa qualidade
Revestimento da superficie com matriz extracelular comercial
Todas as opções estão corretas
33
Um investigador detetou micplasmas numa cultura de celulas que recebeu de um colaborador em Madrid. Qual a provável forma de deteção que utilizou?
inspeção visual da cultura(morfologia celular alterada)
Nenhuma opção está correta
aumento da turbidez do meio
depleção de nutrientes no meio de cultura
alteração visivel do pH
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Uma cultura organotipica caracteriza-se por:
Fazer uma cultura de orgão
Dissociar as células de um orgão e fazer uma co-cultura
Nenhuma das opções está correta
ser útil para a propagação de órgãos
Manter a arquitetura dos tecidos do orgão de origem
35
Num embrião de Xenopus laevis onde se situa a animal cap?
No polo animal
No polo vegetal
Nenhum opção está correta
Numa região adjacente ao organizador de Spermann
Entre o polo vegetal e o poro animal
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Um investigador este a passar culturas celulares numa câmara de fluxo laminar e detectou uma contaminação por fungos. Qual a origem mais provável de contaminação?
Todas as opções estão correta
má técnica asséptica
má manutenção da incubadora que aloja as células
Contaminação por contacto com outras culturas contaminadas
Quebra na contenção da câmara de fluxo por falta de manutenção
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O laboratório de cultura de células é uma infraestrutura muito especializada. Selecione a opção correta sobre a configuração do laboratório de cultura de células:
a área de manipulação estéril pode ser uma zona de circulação de investigadores
A zona de lavagens e preparação deve estar incluida na área de manipulaçáo estéril
A zona de manipulação estéril também pode ser usada para fazer manipulações bacteriológicas
A esterilização de material e a inativação de residuos devem ser feitas em unidades de esterilização diferentes
A zona de armazenamento deve ser afastada das câmaras de fluxo e incubadoras, de preferência fora da zona de manipulação esteril
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A utilização de tripsina pode ser feita a frio ou a 37ºC. Qual a vantagem da tripsinização a frio?
Boa penetração no tecido antes de se aumentar a atividade da tripsina por elevação da temperatura até 37ºC
Evita a utilização de DNAase
Pode ser feita se, agitação
Mais económico porque gasta menos energia
Utiliza-se menos tripsina do que a 37ºC
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Indique qual a sequência correta para estabelecer uma linha celular primária:
descongelar um vial de células criopreservadas, sub-cultura das células; plaqueamento dos pequenos fragmentos numa placa de cultura de células com meio adequado
nenhuma das opções
Descongelar um vial de células criopreservadas: utilização de um enzima para a digestão dos fragmentos: plaqueamento dos pequenos fragmentos numa placa de cultura de células com meio adequado
obter um amostra do tecido de interesse; utilização de uma enzima para a digestão dos fragmentos; plaqueamento dos pequenos fragmentos numa placa de cultura de células com meio adequado
obter uma amostra do tecido de interessa: sub-cultura das celulas; planqueamento dos pequenos fragmentos numa placa de cultura de células com meio adequado
