Biotecnologia de células animais (Prática)
biotecnologia de células animais parte pratica
1
No crescimento das culturas de células HeLa foi usado o meio DMEM suplementado com glutamina, ampicilina + streptomicina e FBS. Qual dos três suplementos, se fosse omitido, não prejudicaria o crescimento das células?
Ampicilina + Streptomicina, pois é um antibiótico para prevenir o crescimento de bactérias e fungos contaminantes. Como as células HeLa são de origem humana, a sua presença ou ausência não terá impacto direto no crescimento. Meio DMEM fornece nutrientes essenciais; glutamina é adicionada para melhorar o crescimento e viabilidade; FBS contém fatores de crescimento como hormonas, nutrientes, protínas, etc
Resposta de escrita
2
Qual dos procedimentos é incorreto na câmara de fluxo laminar que usou nas aulas?
colocar um objeto não estéril na câmara de fluxo laminar
Passar com um objeto não estéril lateralmente a uma placa de cultura aberta
Passar com um objeto não estéril por detrás de uma placa de cultura aberta
Passar com um objeto não estéril à frente de uma placa de cultura aberta
Passar com um objeto não estéril por cima de uma placa de cultura aberta
3
As células criopreservadas foram congeladas num meio com:
Etanol a 90%
DMSO a 10%
Etanol 10%
DMSO a 90%
Glicerol a 40%
4
Na visualização no microscópio de fluorescência o controlo de células não transfectadas e não coradas com DAPI foi usado para:
determinar o comprimento de onda da radiação de excitação
detectar células mortas
Permitir a escolha dos filtros de emissão adequados
Determinar o comprimento de onda da radiação de emissão
descontar a auto-fluorescência das células
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A transfeção foi realizada em meio DMEM sem FBS porque:
fatores de crescimento no soro podem causar divisão celular indesejada
Compostos aminados no soro podem ligar-se ao DNA e impedir a ligação ao PEI
DNases no soro podem degradar o plasmídeo
o soro pode alterar o pH do meio de transfeção
Proteases no soro podem inibir a aderência das células
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Na transfeção de células HeLa com PEI a razão N/P usada foi 24. Este número refere-se à:
Razão entre átomos de azoto e átomo de fósforo
razão entre massas de PEI e DNA
razão entreconcentrações molares de PEI e DNA
Razão entre grupos amina e grupos fosfato
Razão entre cargas positivas e negativas
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Durante a incubação de culturas de células em meio de DMEM, a percentagem de CO2 é amntida entre 5 e 10% a razão é?
o CO2 pode ser usado como fonte de carbono
reproduzir a concentração de CO2 atmosférica na terra
estimular o crescimento celular através do aumento da taxa fotossintética
provocar a alcalinização do meio
Manter o meio a pH fisiológico
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Contaram-se células num hemocitómetro numa suspensão obtida a partir de 20 microlitros da suspensão A e 20 microlitros de uma solução de corante. Foram contadas células em 3 quadrantes de 1mm de lado com um número de células, respetivamente de 96, 103 e 88 células. Qual a concentração de células na suspensão A(células/ml)
(96+103+88)/(3x1000x2)
(96+103+88)/(3x10000x2)
(96+103+88)x(3x10000/2)
(96+103+88)x(3/1000)
(96+103+88)x(10000x3)
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Após 2 dias de crescimento, o nº total de células numa cultura de células HeLa foi de 8x10^5. Com que nº de células é iniciada a cultura?
6x10^5
1x10^3
8x10^3
2x10^5
4x10^5
10
Pretende-se investigar se um fármaco tem um efeito tóxico em células eucariotas. Após exposição de uma hora ao fármaco a viabilidade celular de uma cultura de células HeLa foi avaliada com azul de triptofano. Confirmou-se que a percentagem de células mortas foi significativamente superior na cultura exposta ao composto do que na cultura controlo. Diga como foi possível tirar esta conclusão com base na utilização do corante?
resposta escrita
O corante serve para avaliar a viabilidade celular e ao relaizar a contagem de células coradas e não coradas, pode-se saber a % de células mortas em cada cultura se a cultura exposta ao corante tiver maior % de células coradas em relação ao controlo, então o fármaco teve um efeito tóxico em células eucariotas, levando a um aumento da mortalidade
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Como interpreta o facto de uma cultura apresentar uma cor alaranjada após uma incubação de 48horas?
Crescimento excessivo das células
A concentração de CO2 na incubadora é inferior à ideal
elevada taxa de morte celular
Provável contaminação com leveduras
Provável contaminação com micoplasmas
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Qual a ordem de utilização das soluções nas passagens de células que realizou nas aulas?
PBS, tripsina, DMEM
PBS, tripsina, PBS
Tripsina, PBS,DMEM
DMEM, tripsina, PBS
PBS, DMEM, tripsina
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Foi feita a tripsinização de uma cultura tendo-se obtido as células numa suspensão de 10ml. Adicionou-se 1ml desta suspensão de células a 4ml de meio fresco num novo frasco de cultura T-25. Qual o fator de diluição nesta passagem de células?
1:9
1:4
1:5
4:5
1:10
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O indicador de pH usado nos meios de cultura:
é laranja a pH fisiológico e vermelho a pH alcalino
é rosado a pH fisiológico e vermelho a pH mais acídico
é amarelo a pH fisiológico e vermelho a pH mais acídico
é vermelho a pH fisiológico e alaranjado a pH mais acídico
é vermelho a pH fisiológico e alaranjado a pH mais alcalino
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O material introduzido na câmara de fluxo laminar foi desinfectado com:
etanol a 100%
Hipoclorito de sódio a 0,12%
Glutaraldeído a 1%
Formaldeído a 37%
etanol a 70%
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Os meios de cultura, a longo prazo, devem ser armazenados:
no friogorifico a 4ºC
à temperatura ambiente protegido da luz
no congelador a -20ºC
à temperatura ambiente num local reservado no laboratório
num banho termostatizado a 37ºC
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A passagem de células faz-se normalmente quando a cultura:
está no final da fase de latência
está no inicio da fase de latência
está no final da fase de crescimento exponencial
está no final da fase estacionária
está no inicio da fase de crescimento exponencial
